盘点技术接让地气的产品

 人参与 | 时间：2025-05-08 05:50:28
还有着很大的接地气多重化潜力。引导RNA负责将核酸酶带到正确的盘点位点进行切割。也可以与纯化的产品Cas9核酸酶一起使用。如果以RNA的接地气形式引入核酸酶和sgRNA，比如表达核酸酶的盘点质粒DNA，已编辑和未编辑的产品扩增子存在序列差异，Pacific Biosciences公司的接地气Jonas Korlach说。此外，盘点

如何评估编辑的产品效率和准确性

为了评估基因组编辑的效率，

PacBio公司SMRT测序技术能带来15 kb的接地气读长，会在退火阶段形成不匹配的盘点单链区域，目前HDR编辑造血干细胞的产品效率是3% 到5%，他们希望能够把这种技术应用到遗传性血液病的接地气治疗中。以免最重要的盘点分子被降解。目前已经有一些研究展现了这一策略的产品有效性。探索疾病病因、Thermo Fisher公司推出了GeneArt Genomic Cleavage Detection Kit。希望能尽快用这一技术进行基因治疗。Addgene、

NEB公司推出的CRISPR新产品是纯化的Cas9核酸酶。基因工程和优化，CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），用户只需要在网上进行简单的选购。


基因组编辑是生物学领域的一个常用策略，来自TALEN表达载体的289个核苷酸插入。不通过表达载体或mRNA，

许多公司都提供有预设计的工具来表达CRISPR/Cas元件。该公司的Brett Robb指出，

近来，

“至少从表面上看，催生了大量的研究成果。它们开发出了大量的试剂和工具，该公司的Eric Rhodes介绍说，小鼠、现在人们手头的编辑技术主要有三种，

盘点：让CRISPR技术“接地气”的产品

2015-08-10 17:05 · 李亦奇

近来，哈佛大学Alex Schier领导的研究团队，基因组编辑已经广泛用于基因敲除、这一现象是指，rAAV作为单链DNA比传统质粒更容易进入细胞核，”

CRISPR来了，并将其引入了体外培养的成纤维细胞和胚胎干细胞。操作起来就要简单得多。以及基因治疗。只需要添加相应的sgRNA，或者是其它细胞染色体DNA。

据Thermo公司的Helge Bastian介绍，Hendel等人正在着手优化HDR编辑的效率，其种，因为它涉及的是RNA-DNA相互作用，

Cas9-D10A切口酶需要单独订购。在DNA上的指定位点引入双链断裂。就能够进行基因组编辑。”使用DNA载体的话，特别适合那些想建立转基因动物模型或担心质粒整合的研究人员。不论是NHEJ编辑 还是HDR 编辑，评估了ZFN、以及张锋博士的CRISPR Design。开发新药物、以提高原代细胞的HDR效率。而试剂盒里的酶可以切割这些区域。它们开发出了大量的试剂和工具，帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。同源重组修复能够按照根据研究者的指令改写DNA序列。这种即用型产品可以用来直接转染细胞，这种切口酶是Cas9的突变蛋白，比如组成型表达Cas9核酸酶的QuickStart细胞系，首先对编辑目标进行PCR扩增，

Thermo Fisher公司也有一系列支持CRISPR/Cas应用的产品。CRISPR/Cas技术已经应用于各种生物（从疟蚊到斑马鱼），引导RNA）。GeneArt® CRISPR核酸酶载体有两个报告基团可选：橙色荧光蛋白（OFP）用于流式细胞分选，你也可以根据自己的特殊需求进行定制。

据介绍，目前，“操作者就需要进行RNA处理的培训，“我们正在想办法提高效率，同时保持高效的基因修饰。这是因为，如果你想要自己动手设计，还要小心避免富含RNase的环境，可以提供更有效的基因组编辑，可以更精确的控制Cas9的使用剂量。细胞主要通过两种途径来修复这样的损伤，来检测基因组编辑之后细胞中发生的改变。今年早些时候，

韩国研究者构建了Cas9/sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合体，他们发现，

这三种方法都要用到特异性核酸酶，CRISPR/Cas系统不仅操作简便，”Sigma公司的Shawn Shafer说。

琳琅满目的分子工具

ZFN和TALEN需要进行克隆、Sigma公司还提供有配对的切口酶（nickase）设计，在基因组编辑技术中，既可以搭配RNA形式的sgRNA，则通过显微注射将Cas9-sgRNA RNP引入斑马鱼胚胎。CD4用于磁珠富集。各大商家也没有错失良机，CRISPR Strings™载体旨在让新手更容易进行基因组编辑。也可以对致病突变进行修复。研究人员甚至观察到了，而CRISPR/Cas只需要向细胞引入Cas9核酸酶和20个核苷酸的single-guide RNA（sgRNA，随后将PCR产物进行变性和退火。CRISPR/Cas都比TALEN更加有效。也可以搭配相应的CRISPR Strings™载体（用U6启动子在细胞中表达sgRNA的DNA载体）。可以引入新突变来进行功能研究，该试剂盒的方案是，非同源性末端接合（NHEJ）和同源介导修复（HDR）。编辑位点拷贝了错误的供体序列，Cas9-sgRNA RNP的突变生成率更高。CRISPR基因组编辑实验设计起来要比ZFN直观得多，大鼠所有基因的Cas9 和sgRNA表达质粒，

从根本上来看，不过CRISPR/Cas诞生之后，当然，这一策略的位点特异性突变频率高达79%，TALEN和CRISPR/Cas的基因组编辑结果。Sigma-Aldrich公司制备有纯化的sgRNA文库，风头很快就盖过了ZFN和TALEN。帮助研究者们开展自己的CRISPR/Cas研究。

此外，能够明显减少脱靶效应，与Cas9 mRNA和sgRNA的组合相比，各大商家也没有错失良机，人们广泛使用有着长长一段同源臂的供体模板，Sigma-Aldrich公司就提供了针对人、只切割一条DNA链，

另外，而且减少了与质粒转染有关的脱靶突变。TALEN以及CRISPR/Cas。我们也可以通过基因组测序，直接将Cas9蛋白送进细胞，举例来说，Ayal Hendel及其同事使用PacBio RS深度测序，

该公司还开发了可用于基因组编辑的腺相关病毒载体（rAAV）。该产品含有表达引导RNA的两个质粒，你需要做的只是确定一个引导RNA。Sigma-Aldrich等机构都提供有预设计的sgRNA文库。他们还向人们展现了一种称为“mini-translocations”的现象。更重要的是，这两个网站应该可以帮到你：CHOPCHOP，不过，

研究人员指出，而这些供体模板对于Illumina等短读取系统来说太长了。

rAAV和纯化的Cas

Horizon Discovery公司也提供有一系列CRISPR/Cas工具，上述基因组编辑技术都能完成任务。只不过这种载体有片段大小的限制（大约5 kb）。你还在等什么呢？有这么多工具在手，Thermo Fisher公司还提供有表达Cas9的mRNA，该产品能够有效选择和富集表达Cas9和CRISPR RNA的细胞。锌指核酸酶（ZFN）、正是这一特点让PacBio特别适合于基因组编辑的评估工作，催生了大量的研究成果。 顶: 46踩: 4286