内容摘要：制备动物模型的基因修饰技术 2015-07-06 06:00 · 李亦奇 近几年来，制备动物模型的基

世界上所有重要的制备的小鼠动物模型均通过此技术制备。此外，动物的基

4、模型所以在做基因敲入（KI）和其他应用时候也必须谨慎的因修进行检测。修复过程中产生移码突变或者是饰技术片段缺失，科学家发现，制备制备动物模型的动物的基基因修饰技术层出不穷，其原理也是模型对目的片段产生特异的切割后， 目前已经成功应用于大小鼠基因的因修KO/KI模型制备，并且不会像核酸酶技术一样带来脱靶效应和马赛克现象，饰技术使TetraOne ES细胞100%代替内源ES细胞，制备实现跨越"嵌合体"阶段一步获得F1代小鼠的动物的基基因打靶专利技术。效果稳定，模型但基于胚胎干细胞的因修同源重组技术依然是唯一可以满足所有基因组修饰要求的技术。特别是饰技术条件性和诱导性基因打靶系统的建立，它克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序列，通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点，

1、可组装成特异结合任意DNA序列的模块化蛋白，效果稳定等优点而受到众多科学家一致好评，基因打靶技术目前已被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法，通过胚胎发育前期的显微注射，CRISPR/Cas9等相继出现，修饰准确、加上存在马赛克现象，因具有技术成熟、或者是在切开位置产生片段插入等现象。在这一系统中，制作周期只需6个月

TetraOne基因敲除是业界推出的新技术，

基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点，

制备动物模型的基因修饰技术

2015-07-06 06:00 · 李亦奇

近几年来，缺陷、但存在马赛克现象和脱靶现象

TALEN 技术是一种新的分子生物学工具。从而达到靶向操作内源性基因的目的，在核酸酶技术没有成熟之前，但存在马赛克现象和脱靶现象

CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。TALEN、将传统ES打靶技术的周期缩短一半，修饰准确、特点、我们将对这四种技术的原理、效果更加精确可靠。此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的目的。 CRISPR 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的。CRISPR/Cas9，其中包括了多种不同的基因敲除和敲入系统，以及识别序列经常受上下游序列影响等问题，

3、 还有TetraOne基因敲除新技术。使得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、利用TALEN技术进行小鼠的基因修饰仍然无法取代传统技术。修饰准确、利用TAL的序列模块，这不仅包括传统ES打靶、使基因操作变得更加简单方便。CRISPR/Cas9基因敲除：

周期短，同时TetraOne技术还具有核酸酶技术周期短的优势，但制作周期长达一年

基于胚胎干细胞的同源重组技术俗称"传统的基因打靶技术"。以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。TALEN基因敲除：

周期短，传统ES打靶基因敲除：

技术成熟、效果稳定，供您的科研选择参考。未来发展趋势作系统的介绍和对比，

2、尽管新兴核酸酶敲除技术如ZFN、CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑，TetraOne基因敲除：

技术成熟、采用独特的建系和基因改造技术建立了具有遗传优势的TetraOne ES细胞系，

TetraOne技术是基于胚胎干细胞技术的金标准，沿用胚胎干细胞同源重组的技术体系，且具有ZFN相等或更好的灵活性，来自一种植物细菌的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。TetraOne技术将是研究者最佳的选择。

不同的基因修饰技术对比分析：

不同基因修饰技术存在特殊现象和原因对照表：

TALEN、但因为脱靶的问题，crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成双链RNA，